多酚氧化酶（Polyphenol Oxidase, PPO, EC1.10.3.1）主要存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是一種含銅的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化產(chǎn)生醌，從而引起褐化，與果蔬加工、茶葉品質(zhì)和組培等密切相關(guān)。本試劑盒提供了一種簡單的檢測方法，用于檢測生物樣本，如血漿、血清、果汁、動植物組織、細(xì)胞以及細(xì)菌樣本中多酚氧化酶（PPO）的活性水平。在測定中，樣本中的多酚氧化酶（PPO）能夠催化鄰苯二酚產(chǎn)生醌，后者在400nm有特征光吸收，測定400nm光吸收增加的速率，計(jì)算多酚氧化酶（PPO）活性。
酶標(biāo)儀或可見分光光度計(jì)（能測400nm處的吸光度）及水浴鍋
96孔板或微量玻璃比色皿、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
低溫離心機(jī)、制冰機(jī)
去離子水
勻漿器（如果是組織樣本）
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通?？梢园幢壤s小，如說明書中是約0.1g組織加1ml提取液，可以等比例縮小，如0.05g組織加0.5ml提取液提取。后續(xù)操作不變。此外，對于數(shù)量少、酶活性低的樣品，一方面可以減少提取液體積，另一方面還可以延長反應(yīng)時間。
1. 樣品盡可能液氮速凍后保存在-80℃冰箱中，以減少酶活性變化。粗酶液提取全程應(yīng)該保持低溫，包括樣品稱量應(yīng)該迅速完成，粗酶液提取應(yīng)該在冰浴中進(jìn)行，離心應(yīng)該在4℃左右進(jìn)行，測定過程中粗酶液應(yīng)該保存在冰浴中。此外，粗酶液提取后應(yīng)該盡快完成測定，通常不可以留到第二天測定。
2. 在對樣本進(jìn)行提取時，加完提取液好不要用液氮研磨，而且樣本不要反復(fù)凍融，這樣會破壞酶的活性。凍融會影響蛋白的三級結(jié)構(gòu)，對酶活性有一定影響，對于動植物組織，可以直接研磨，對于細(xì)胞或細(xì)菌之類的樣品，可以使用超聲波。
3. 提取要根據(jù)不同樣本特點(diǎn)進(jìn)行，原則是提取充分和保持活性。對于有細(xì)胞壁的樣品，一定要注意破壁方法；對于分布于特定細(xì)胞器中的成分，原則上先分離該細(xì)胞器，然后再從收集的細(xì)胞器中進(jìn)一步提取需要的成分。對于存在于膜上的成分，要注意如何分離，去垢劑的使用要小心，以避免酶失活。使用超聲波破碎，一定要防止溫度升高導(dǎo)致失活。特殊樣品可以查閱相關(guān)文獻(xiàn)，參考前人提取方法，或者咨詢我們的研發(fā)專家。
生化試劑盒初一般是采用分光光度法，用分光光度計(jì)測量吸光度。微量法是隨著酶標(biāo)儀和微孔板的普及，改用酶標(biāo)儀和酶標(biāo)板測量吸光度。除了儀器不同以外，主要差別是反應(yīng)體系更小，一般不超過250ul，計(jì)算公式的系數(shù)會有一定變化。
d：由比色皿光徑，1cm改為96孔板直徑，0.5 cm（也有0.6cm的）
但對于標(biāo)明只用分光光度法的試劑盒，不建議使用酶標(biāo)儀進(jìn)行酶活性測定。非要用酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測，一定要按照說明書將反應(yīng)體系縮小至250微升左右，加樣表中各試劑體積一定要按照比例縮小。不過，因?yàn)槌跹邪l(fā)時是按照分光光度法進(jìn)行設(shè)計(jì)和調(diào)整的，用戶改變測定儀器后，我們不保證能夠取得好的結(jié)果。
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