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與傳統基于活細胞的胞內蛋白表達體系相比，無細胞重組蛋白合成（CFPS）平臺以完全體外重構的轉錄- 翻譯級聯為核心，顯著簡化了實驗流程，同時賦予研究者對反應體系溫度、pH、氧化還原環境、離子強度及 底物濃度等關鍵參數的精確控制能力。由于反應在開放體系中進行，用戶無需顧慮細胞膜的完整性、宿主毒 性或質?？截悢挡▌拥壬飳W瓶頸，可直接向反應體系中補充能量再生組分、分子伴侶、折疊酶、穩定劑以 及同位素或熒光標記物，從而實現高通量、可編程且高度可重復的蛋白質合成。 普美生物基于多年蛋白表達與純化經驗，推出新一代 CFPS 系統。該系統以經過深度優化的原核細胞裂解 液為骨架，額外混合了 T7 RNA 聚合酶、能量再生酶系、能量底物（ATP、GTP、UTP、CTP）、氨基酸混合 物、鎂離子、鉀離子及還原劑等，提供了“即開即用”的一管式解決方案，確保從模板 DNA 到功能性蛋白僅 耗時數小時。在透析式 CFPS 反應中（Figure 1），實驗人員首先需制備高純度模板 DNA：既可采用經典堿裂 解法大量提取超螺旋質粒，亦可直接使用試劑盒附帶的高保真 PCR 預混液，通過 PCR 快速獲得含 T7 啟動 子、核糖體結合位點（RBS）及終止子的線性模版，該策略省去了繁瑣的克隆與轉化步驟。隨后，在無菌無 核酸酶的微量離心管中建立 CFPS 反應，并轉移至附送的微型透析裝置中，隨后將該裝置置于 10 倍體積的透 析外液中。該緩沖液含有高濃度氨基酸、核苷三磷酸、能量再生底物及緩沖鹽離子等。透析膜允許小分子化 合物自由擴散，而核糖體、酶復合物、DNA 及新生多肽則被限制在反應腔內，實現底物持續供給與代謝副產 物（如無機磷酸鹽、ADP、焦磷酸鹽）的同步移除，從而將反應時間延長至 12–48h，蛋白產量提升 5–20 倍，可溶性蛋白比例顯著增加。 此外，該透析式平臺兼容多種下游應用：通過引入硒代甲硫氨酸或1? N/13C 標記氨基酸，可高效制備同 位素標記蛋白用于 NMR 結構解析；在反應體系中加入表面活性劑或納米圓盤（nanodisc）組裝組分，可實現 膜蛋白的正確折疊與穩定；結合連續交換式反應器（CECF）或微流控芯片，可實現毫升級甚至升級規模的平 行放大，滿足藥物篩選、疫苗研發及功能酶庫構建的迫切需求

1.該反應對核酸酶非常敏感，因此請務必全稱佩戴手套，并采用去核酸酶的溶劑，槍頭和離心管。 2.模板 DNA 的純度和濃度對該反應至關重要，因此請務必在反應前檢查并確認 DNA 模板樣品的質量。模板 DNA 不能為小提（Miniprep）樣品。 3.建議做 200 uL 陰性對照反應，用其跟用戶反應或陽性對照反應對比，進而確認目的蛋白或對照蛋白是否表 達。