
多聚賴氨酸溶液英文名為 Poly-L-lysine Solution 簡稱 PLL。Leagene Poly-L-lysine 為 Poly-L-lysine hydrobromide,分子式為 L-Lys- (L-Lys)n-L-Lys?xHBr,分子量為 150,000~300,000,CAS Number 25988-63-0。
PLL 是一種粘附劑,常用于載玻片的包被,可以直接稀釋后用于細胞或組織培養方面的實驗。分子量大于70,000 的多聚賴氨酸可以促進細胞貼壁生長,本產品可以用于促進細胞的貼壁生長和核酸雜交。制備好的載玻片可 4℃保存半年。

用于細胞培養
①根據實驗需要 Poly-L-lysine Solution 稀釋至適當濃度溶液后即可使用。不同的細胞,Poly-L-lysine Solution 包被(Coating)的時間和濃度,甚至稀釋液的選擇有所不同,請自行參考相關文獻進行適當的包被。 ②Poly-L-lysine Solution 用于細胞培養時,包被至少 5min,有些實驗需要包被 1~2h,有些情況則需要包被過夜。
③包被完成后,吸 Poly-L-lysine Solution,干燥培養器皿,至肉眼觀察完全干燥。通風櫥內吹風數分鐘即可完成干燥,對于有些實驗則需要干燥 2h 或更長時間。干燥時間較長通常會更加有利于后續的細胞粘附。
④進行細胞培養,也可以用水、PBS 或培養液等適當溶液潤洗后再進行細胞培養。
用于核酸雜交
①方法一:取事先準備好的載玻片或蓋玻片經 160℃冷卻至室溫,在 Poly-L-lysine Solution 上下浸蘸幾下, 自然干燥,4℃備用,亦可室溫保存 1 個月。
②方法二:Poly-L-lysine Solution 涂于玻片上, 自然干燥后即可使用,可用于細胞涂片和切片。
③方法三:滴加 5~10μl Poly-L-lysine Solution 至玻片上,用另一蓋玻片以血涂片方法推片或用另一玻片緊貼于其上,相互摩擦以使兩玻片相對的一面涂布上明膠包被溶液。
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答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
答:可能的原因有:
1、膠濃度不對,不同濃度的膠跑出的蛋白條帶的位置可能有所偏差,可以調整濃度;
2、抗體孵育不充分,建議增加抗體濃度,延長孵育時間;
3、酶失活,建議直接將酶和底物進行混合,如果不顯色則說明酶失活了。選擇在有效期內、有活性的酶聯物;
4、目的蛋白存在翻譯后修飾或剪切體,建議查詢相關文獻確定;
5、標本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建議設置陽性對照比對結果,增加標本上樣量。
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