本產(chǎn)品可顯影蛋白Marker(13-154kDa)為預(yù)染可曝光蛋白marker，由8種高純度的非預(yù)染重組蛋白和4種預(yù)染重組蛋白組成，指示的蛋白質(zhì)分子量大小為13-154kDa（13、22、28、38、50、62、70、78、113、140、154kDa），其中70kDa為玫紅色預(yù)染條帶，13、28、140kDa均為藍(lán)色預(yù)染條帶，方便動態(tài)觀察蛋白質(zhì)電泳狀態(tài)或判斷蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)膜效果。8條非預(yù)染重組蛋白可以結(jié)合幾乎所有類型抗體（雞抗體除外），可與目的蛋白質(zhì)同時結(jié)合抗體并經(jīng)ECL或其他方式顯色。
產(chǎn)品編號 | 名稱 | 規(guī)格 |
PMK0829- 1 | 可顯影蛋白Marker | 250ul |
PMK0829-2 | 緩沖液 | 1ml |
1.本產(chǎn)品為即用型，無需加入還原劑或加熱，取-20℃保存的可顯影蛋白Marker于室溫下解凍后輕輕充分混勻后即可使用；
2.由于市面上抗體效價有差異，建議實驗室在初次使用本產(chǎn)品時可以根據(jù)自身的實驗條件和實驗習(xí)慣通過預(yù)實驗確定合適的稀釋比例，這樣既可以節(jié)約成本，同時也可獲得效果更佳的實驗圖片；（建議僅供參考：對于使用一抗為鼠源抗體建議取本產(chǎn)品5ul與實驗樣品同時進(jìn)行蛋白電泳；對于使用一抗為兔源抗體建議將本產(chǎn)品利用提供的緩沖液稀釋4倍后取5ul與實驗樣品同時進(jìn)行蛋白電泳）
3.可顯影蛋白Marker使用完后及時保存于-20℃（建議分裝保存使用）。
1.可顯影蛋白Marker不能100℃加熱或者煮沸，否則會導(dǎo)致蛋白條帶發(fā)生降解或失去效果；
2.若可顯影蛋白Marker顯色條帶較粗時，可以用緩沖液適當(dāng)稀釋后使用，稀釋后Marker中4個預(yù)染蛋白條帶顏色會相應(yīng)變?nèi)酰瑢儆谡，F(xiàn)象；
3.由于市面上抗體特異性參差不齊，所以遇到預(yù)染條帶被顯影屬于正常現(xiàn)象，根據(jù)位置大小可以明顯區(qū)分；
4.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
5.本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
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答：如果能夠排除下面的幾個問題，那么問題多半出現(xiàn)在一抗和抗原制備上。
1、二抗的HRP 活性太強，將底物消耗光；
2、ECL底物中H2O2不穩(wěn)定，失活；
3、ECL底物沒覆蓋到相應(yīng)位置；
4、一抗選擇不當(dāng)；
5、二抗失活。
答：可能的原因有：
1、膜沒有完全均勻濕透,建議 使用100% methanol浸透膜；
2、洗膜不充分，可以增加洗液體積和洗滌次數(shù)；
3、電極不平衡或者加樣位置偏斜，可以調(diào)整電極和加樣；
4、封閉物用量不足，可以提高封閉物濃度，孵育時保證封閉液完全浸沒轉(zhuǎn)印膜；
5、封閉物使用不當(dāng)，比如檢測生物素標(biāo)記的蛋白時不可用脫脂奶粉封閉；
6、封閉時間不夠，一般情況下室溫37度封閉1小時以上或者4度封閉過夜；
7、抗體非特異性結(jié)合，可以降低抗體濃度，減少孵育時間；
8、一抗稀釋度不適宜，可以對抗體進(jìn)行滴度測試，選擇適宜的抗體稀釋度；
9、一抗孵育的溫度偏高，建議4℃結(jié)合過夜；
10、抗體濃度過高或洗滌不夠，建議降低抗體濃度，增加洗滌次數(shù)和時間；
11、化學(xué)顯色底物過多，建議按說明書加入適量的顯色底物。
答：可能的原因有：
1、膠凝的不均勻或聚合不好，建議灌膠前將溶液充分混勻；
2、某些樣品鹽濃度較高，建議除鹽或?qū)悠符}濃度調(diào)成一致；
3、緩沖液陳舊，成分改變,可以重配；
4、凝膠下面有氣泡,電泳前要先將氣泡趕走；
5、電泳時溫度過高，可以降低電流或電壓；
6、樣品中含有不溶性顆粒，建議樣品充分?jǐn)嚢杌靹颉?/p>
答：可能的原因有：
1、膠濃度不對，不同濃度的膠跑出的蛋白條帶的位置可能有所偏差，可以調(diào)整濃度；
2、抗體孵育不充分,建議增加抗體濃度，延長孵育時間；
3、酶失活，建議直接將酶和底物進(jìn)行混合，如果不顯色則說明酶失活了。選擇在有效期內(nèi)、有活性的酶聯(lián)物；
4、目的蛋白存在翻譯后修飾或剪切體，建議查詢相關(guān)文獻(xiàn)確定；
5、標(biāo)本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低，建議設(shè)置陽性對照比對結(jié)果，增加標(biāo)本上樣量。
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