
本預制膠為 Bis-Tris 中性緩沖體系,膠板為塑料材質,具有優良的分離效果,電泳后條帶清晰銳利,預制膠凝膠穩定性好,為使用者帶來更安全,更高效,更便捷的科研使用體驗。
本預制膠提供不同濃度的梯度膠和固定濃度膠,梯度膠有 4-20%,4-12%,固定濃度膠有 8%,10%,12%三種,10孔膠的大上樣量為 50μl,15 孔膠的大上樣量為 30μl。
預制膠膠板兼容目前市場大多數電泳槽,包括:Bio-Rad Mini-PROTEAN (II/3/Tetra System);
Hoefer Mighty Small (SE250/SE260/SE280);Life Technology Novex Mini-Cell;北京六一 DYCZ-25E、DYCZ-24DN、DYCZ-24K、DYCZ-24KS、DYCZ-24KF;君意東方JY-SCZ2+;天能 VE180;以及其它能容納膠板寬度在 10cm 的電泳槽。



1. 準備電泳緩沖液:取一包電泳緩沖液粉末(MOPS-SDS電泳緩沖液即用粉末,貨號:PMK0203)溶解在 1L 的去離子水中。
2. 將預制膠從包裝袋中取出撕掉膠板底部的膠條,緩慢地拔出梳子,將預制膠固定在電泳槽中。電泳槽內槽倒入足夠的電泳緩沖液,內槽電泳緩沖液覆蓋上樣孔,外槽的電泳液加到 1/3 液面處即可,高不可漫過膠板。
3. 上樣:用5XSDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(貨號:PMK0012)處理樣品,移液器吸取樣品后槍頭以垂直方向 輕輕插入到上樣孔中即可上樣。注意槍頭不要戳破凝膠,也不要過度插入梳孔使膠板變型造成漏液。
4. 電泳條件:推薦電壓160V,當溴酚藍指示帶電泳至凝膠底部,或實驗預定位置時,即可結束電泳。
5. 電泳結束,取出凝膠。使用撬具或其他合適的工具插入到膠板兩側之間的空隙中,用撬具慢慢地
上下撬動膠板,重復上述操作,撬動上、中、下三個不同的位置直至膠板兩側完全打開。
6. 膠板打開后,凝膠可能粘在膠板的任意一側,取下無凝膠的一側,將另一側的膠板傾斜至水中,輕輕撥動凝膠,使凝膠自由掉落到裝有去離子水的器皿中晃動清洗凝膠,然后取出進行染色或轉膜保存條件2-8℃保存,自生產之日起 12 個月有效。

1. 本預制膠不能置于 0℃以下冷凍,否則凝膠會凍裂。
2. 電泳緩沖液建議使用次數不超過 3 次,如長時間不用請冷藏保存。
3. Bio-Rad 電泳槽使用時將框架內綠色硅膠密封條取出,將其平坦的一面朝外并重新裝回凹槽中壓緊。
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答:可能的原因有:
1、膠濃度不對,不同濃度的膠跑出的蛋白條帶的位置可能有所偏差,可以調整濃度;
2、抗體孵育不充分,建議增加抗體濃度,延長孵育時間;
3、酶失活,建議直接將酶和底物進行混合,如果不顯色則說明酶失活了。選擇在有效期內、有活性的酶聯物;
4、目的蛋白存在翻譯后修飾或剪切體,建議查詢相關文獻確定;
5、標本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低,建議設置陽性對照比對結果,增加標本上樣量。
答:可能的原因有:
1、目的蛋白有多個修飾位點,本身可以呈現多條帶,建議查閱文獻或進行生物信息學分析,獲得蛋白序列的修飾位點信息,通過去修飾確定蛋白實際大小;
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑;樣本處理時在冰上操作;
3、雜蛋白多,建議處理目的蛋白;
4、抗體特異性不強,建議使用特異性強的抗體;
5、抗體孵育時間過久,建議減少抗體孵育時間;
6、二抗與抗原有交叉反應,建議選擇合適的封閉物;
7、二聚體或多聚體存在,建議增加蛋白質變性過程及強度;
8、底物顯色與曝光時間過長,建議縮短顯色及曝光的時間。
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