吐溫-20 (Tween-20)是屬于聚山梨醇酯家族的一種聚氧乙烯山梨糖醇酯，非離子型表面活性劑，易溶于水。琥珀色油狀液體，具有特殊的臭氣和微弱苦味。Tween-20 是一種廣泛用于生物化學應用中的非離子去垢劑，常用作乳化劑、分散劑、增溶劑、穩定劑等。Tween-20 也可用于預提取細胞膜以去除外周蛋白，已被用作基于膜的免疫分析的封阻劑。
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答：可能的原因有：
1、膠濃度不對，不同濃度的膠跑出的蛋白條帶的位置可能有所偏差，可以調整濃度；
2、抗體孵育不充分,建議增加抗體濃度，延長孵育時間；
3、酶失活，建議直接將酶和底物進行混合，如果不顯色則說明酶失活了。選擇在有效期內、有活性的酶聯物；
4、目的蛋白存在翻譯后修飾或剪切體，建議查詢相關文獻確定；
5、標本中不含靶蛋白或靶蛋白含量太低，建議設置陽性對照比對結果，增加標本上樣量。
答：一般5×10^6就足夠。
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