5% BSA封閉液適用于Western Blot、ELISA以及免疫組化實驗中非特異性蛋白結(jié)合位點的封閉。封閉后，可以減小后續(xù)的一抗或二抗等和載體的非特異性結(jié)合，降低背景，增強信噪比，以達(dá)到理想的顯色效果。
5% BSA封閉液為即用型，無需稀釋。封閉步驟中加入足夠量的BSA封閉液充分覆蓋載體表面，振蕩封閉，封閉時間依據(jù)實驗而定，一般室溫封閉半小時至1小時，然后進(jìn)行抗體孵育等后續(xù)操作。
通常在室溫封閉60分鐘即可。對于一些背景非常高的抗體，可以4℃封閉過夜。
1.Zhou W ,Li X ,Yang X , et al.The In Vitro Promoting Angiogenesis Roles of Exosomes Derived from the Protoscoleces of Echinococcus multilocularis.[J].Journal of microbiology and biotechnology,2024,34(7):11-10. (IF 2.5)
2.Zhoujia H ,Wei Z ,Lin H , et al.Kaempferol exerts antioxidant effects in age-related diminished ovarian reserve by regulating the HSP90/NRF2 pathway.[J].Chemical biology & drug design,2023,103(1): (IF 3)
答：可能的原因有：
1、目的蛋白有多個修飾位點，本身可以呈現(xiàn)多條帶，建議查閱文獻(xiàn)或進(jìn)行生物信息學(xué)分析，獲得蛋白序列的修飾位點信息，通過去修飾確定蛋白實際大小；
2、樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解,建議加入蛋白酶抑制劑；樣本處理時在冰上操作；
3、雜蛋白多，建議處理目的蛋白；
4、抗體特異性不強，建議使用特異性強的抗體；
5、抗體孵育時間過久，建議減少抗體孵育時間；
6、二抗與抗原有交叉反應(yīng)，建議選擇合適的封閉物；
7、二聚體或多聚體存在，建議增加蛋白質(zhì)變性過程及強度；
8、底物顯色與曝光時間過長，建議縮短顯色及曝光的時間。
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