
固定的目的在于保存細胞和組織的原有形態結構,固定劑能阻止內源性溶酶體酶對自身組織和細胞的自溶、抑制細菌和霉菌的生長。固定劑通過凝固、生成添加化合物等使蛋白質內部結構發生改變,從而使酶失活。固定劑對細胞核細胞外成分發生物理改變。固定液主要分為醛類固定液、汞類固定液、醇類固定液、氧化劑類固定液、苦味酸鹽類固定液等,較為常用的是醛類中的福爾馬林、醇類中的乙醇。
福爾馬林固定液(10%)主要由甲醛、去離子水組成,該固定液適合于絕大多數組織的固定。

1、按實驗具體要求操作。一般標本固定時間控制在1~4h,大標本應適當延長固定時間。
2、固定好的組織,可在福爾馬林固定液(10%)或70%乙醇中長期保存。

福爾馬林固定液(10%)有一定刺激性和腐蝕性,請在通風較好的環境下操作, 避免吸入。
固定液pH好接近用中性,pH范圍6~8。
組織取材的厚度不同,固定時間也不同。常規活檢組織比較適合的厚度為2~4mm,一般不超過6mm。對組織恰當的選材有利于固定液的滲透。
固定液的容量應足夠,一般固定液與組織塊的體積比率應大于10:1。如果容積不夠大,可以在固定期間更換1~3次固定液。
溫度對固定的影響很明顯,提高溫度可以加速固定作用,但溫度不宜過高。
取出新鮮組織后,應及時固定,無法及時固定時,應保存于生理鹽水中及時送檢。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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答:可能的原因有:
1、IHC實驗一抗和二抗不兼容;
2、沒有足夠的一抗與目的蛋白結合;
3、抗體可能不適用于IHC,因為其可能無法識別蛋白的天然(3D)形式;
4、一抗/二抗/信號放大試劑盒可能因儲存不當、稀釋不當或多次反復凍融而失去活性;
5、該蛋白不存在于目標組織中;
6、目的蛋白在組織中含量并不豐富;
7、二抗未避光保存(進行熒光檢測時);
8、脫蠟可能不充分;
9、固定步驟可能會改變抗體識別的抗原表位;
10、抗體不能穿透蛋白所定位的細胞核(核蛋白);
11、PBS緩沖液被細菌污染,細菌會破壞目的蛋白上的磷酸基團(磷酸化蛋白);
12、抗原修復不全,對于甲醛固定的組織必須用充分抗原修復來打開抗原表位,以利于與抗體結合。
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