異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷簡稱IPTG，分子式為C9H18O5S，分子量為238.30CAS號為367-93-1。IPTG是一種作用極強(qiáng)的誘導(dǎo)劑，不易被細(xì)菌代謝而且很穩(wěn)定。基于這個(gè)特性，當(dāng)攜帶帶lacZ 基因載體DNA以lacZ 缺失細(xì)胞為宿主進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí)、或用M13噬菌體的載體DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí)，如果在平板培養(yǎng)基中加入X–gal和IPTG，由于β–半乳糖苷酶的α–互補(bǔ)性，可根據(jù)是否呈現(xiàn)藍(lán)/白色菌落(或噬菌斑)判斷出基因重組體。此外，它還可以作為具有l(wèi)ac或tac等啟動子的表達(dá)載體的表達(dá)誘導(dǎo)物使用。IPTG溶液(50mg/ml)經(jīng)過濾除菌，一般工作濃度為1mM，主要用于誘導(dǎo)外源基因的表達(dá)，也用于原核表達(dá)系統(tǒng)，使其表達(dá)量增高，產(chǎn)物穩(wěn)定，且易鑒定、易純化。IPTG經(jīng)常與X-Gal合用，X-Gal的工作濃度一般在5～10μg/ml。
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答：可能的原因有：
1、膜沒有完全均勻濕透,建議 使用100% methanol浸透膜；
2、洗膜不充分，可以增加洗液體積和洗滌次數(shù)；
3、電極不平衡或者加樣位置偏斜，可以調(diào)整電極和加樣；
4、封閉物用量不足，可以提高封閉物濃度，孵育時(shí)保證封閉液完全浸沒轉(zhuǎn)印膜；
5、封閉物使用不當(dāng)，比如檢測生物素標(biāo)記的蛋白時(shí)不可用脫脂奶粉封閉；
6、封閉時(shí)間不夠，一般情況下室溫37度封閉1小時(shí)以上或者4度封閉過夜；
7、抗體非特異性結(jié)合，可以降低抗體濃度，減少孵育時(shí)間；
8、一抗稀釋度不適宜，可以對抗體進(jìn)行滴度測試，選擇適宜的抗體稀釋度；
9、一抗孵育的溫度偏高，建議4℃結(jié)合過夜；
10、抗體濃度過高或洗滌不夠，建議降低抗體濃度，增加洗滌次數(shù)和時(shí)間；
11、化學(xué)顯色底物過多，建議按說明書加入適量的顯色底物。
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