
牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份,常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能:
(1)提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物,以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。
(2)提供結(jié)合蛋白,能識(shí)別維生素、脂類(lèi)、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
(3)有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。
(4)是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來(lái)源。
(5)起酸堿度緩沖液作用。
(6)提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。
(7)超級(jí)血清能兼容市面上基本上所有細(xì)胞,尤其是難養(yǎng)的干細(xì)胞;特級(jí)能兼容90%以上細(xì)胞;
根據(jù)牛出生時(shí)間和血清采制分離方法,血清一般分為胎牛血清、新生牛血清和小牛血清。胎牛血清為八月齡胎牛心臟穿刺取血再經(jīng)熱滅活、透析、過(guò)濾除菌后制成。本產(chǎn)品為特級(jí)胎牛血清,經(jīng)過(guò)0.1 μm過(guò)濾除菌,低溫緩慢解凍后即可使用。適用于干細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞、原代體細(xì)胞、傳代體細(xì)胞、基因改造細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、異倍體細(xì)胞等細(xì)胞的培養(yǎng)與保存。

1. 解凍:溫和的升溫過(guò)程可有效減少沉淀的產(chǎn)生,不推薦直接高溫解凍血清。
1)將凍存的血清移到2-8℃的冰箱中,過(guò)夜解凍;
2)或者將血清移至37℃水浴中,間歇性搖晃混勻底部的溶解物,直至全部溶解。
2. 基礎(chǔ)培養(yǎng)基中胎牛血清的使用濃度一般為5-20%,根據(jù)細(xì)胞種類(lèi)及實(shí)驗(yàn)需求按比例添加。

1. 避免反復(fù)凍融。血清解凍后,可在2-8℃條件下儲(chǔ)存6周。如解凍后的血清儲(chǔ)存時(shí)間需要大于6周,建議分裝成合適的體積并重新凍存。
2. 如血清中含有大量的沉淀,不建議直接過(guò)濾血清。如有過(guò)濾需求,可將血清分裝至無(wú)菌離心管中,稍微離心,取上清液直接加入培養(yǎng)基內(nèi)混合后再過(guò)濾。
3. 若血清沒(méi)有混勻且放置于高于40℃的水浴中,底部的蛋白會(huì)變性形成沉淀。
4. 使用時(shí)注意無(wú)菌操作,防止細(xì)菌污染。
5. 操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服,佩戴一次性手套。
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由于在37℃的溫度下培養(yǎng),會(huì)加劇纖維蛋白的析出和磷酸鈣顆粒產(chǎn)生,可采用空培方式驗(yàn)證污染,血清按所需比例加入無(wú)菌培養(yǎng)基中(不加雙抗),放培養(yǎng)箱中過(guò)夜,觀察空培外觀,若為澄清,則血清無(wú)污染。還可以通過(guò)將血清接種在細(xì)菌培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),觀察是否存在細(xì)菌增殖,并且進(jìn)行革蘭氏染色,用油鏡觀察直接判斷是否為微生物污染。
血清中產(chǎn)生沉淀原因可能是:
① 血清熱滅活;② 37℃ 孵育;③ 頻繁的解凍與凍存操作;④ 解凍過(guò)程中未混合;⑤ 經(jīng)γ-輻照;⑥ 2-8℃ 長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存;如果血清中含有沉淀,
若去除這些絮狀沉淀物,可將血清分裝至無(wú)菌離心管中,以3000rpm離心5-15min,去除大顆粒沉淀,收集上清液加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾。
當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)需更換血清品牌時(shí),做程序性梯度替換方案尤為重要,因?yàn)椴煌放频难逅煞钟兴町?,血清更換會(huì)使細(xì)胞發(fā)生不適,從而出現(xiàn)細(xì)胞增殖緩慢或細(xì)胞狀態(tài)不佳等情況。
血清梯度替換過(guò)程如下:
(1)用20%新血清與80%原血清進(jìn)行混合,培養(yǎng)傳代1-2次;
(2)用50%新血清與50%原血清混合培養(yǎng)傳代;
(3)再用80%新血清與20%原血清混合培養(yǎng)傳代;
(4)完全使用新血清培養(yǎng)傳代。
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