Calcein AM是在Calcein (鈣黃綠素)的基礎(chǔ)上增加了乙酰氧基甲酯(AM)基團(tuán)，加強(qiáng)了疏水性，因此能夠很容易穿透活細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，從而標(biāo)記細(xì)胞。Calcein AM本身并無(wú)熒光，進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞中內(nèi)源性酯酶水解生成具有強(qiáng)負(fù)電荷的不能通透細(xì)胞膜的極性分子鈣黃綠素(Calcein)，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)，而Calcein可發(fā)出強(qiáng)綠色熒光。由于死細(xì)胞缺乏酯酶，Calcein AM進(jìn)入細(xì)胞后僅活細(xì)胞會(huì)被染色為綠色熒光，所以可對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行定量熒光檢測(cè)。與其它同類探針相比，由于Calcein AM的細(xì)胞毒性非常低，幾乎不會(huì)影響細(xì)胞功能如細(xì)胞增殖或淋巴細(xì)胞的趨化性等，而且對(duì)pH值敏感性低，所以Calcein AM是目前活細(xì)胞熒光染色的理想探針之一。近年來(lái)Calcein AM也被廣泛用于細(xì)胞活性、細(xì)胞毒性或細(xì)胞增殖的檢測(cè)。Calcein AM細(xì)胞活性檢測(cè)試劑盒是一種通過Calcein-AM熒光探針標(biāo)記活細(xì)胞從而簡(jiǎn)單、快速、靈敏、準(zhǔn)確地用于細(xì)胞活性、細(xì)胞毒性或細(xì)胞增殖檢測(cè)的試劑盒。本試劑盒由于能用于活細(xì)胞的精確定量，也被稱為細(xì)胞熒光計(jì)數(shù)試劑盒(Cell Fluorescence Counting Kit)，簡(jiǎn)稱Cell Fluorescence Counting Kit-F、CCK-F或CCKF。本試劑盒通常推薦使用熒光酶標(biāo)儀進(jìn)行定量檢測(cè)，也可以使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行定量檢測(cè)。如果有必要，也可以使用熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡進(jìn)行細(xì)胞的熒光檢測(cè)。
熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡、離心機(jī)
細(xì)胞培養(yǎng)板、可調(diào)節(jié)式移液槍及槍頭
去離子水、PBS
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答：可能的原因包括培養(yǎng)基質(zhì)量、血清質(zhì)量、溫度、pH值、氣體比例等。
解決方法有：
1. 使用高質(zhì)量的培養(yǎng)基和血清，確保其無(wú)菌、無(wú)支原體污染，并保證在保質(zhì)期內(nèi)使用；
2. 培養(yǎng)箱溫度和氣體比例要保持穩(wěn)定，定期校準(zhǔn)；
3. 每天檢查并記錄細(xì)胞培養(yǎng)的環(huán)境參數(shù)，如溫度、pH值、氣體比例等，以便及時(shí)發(fā)現(xiàn)問題；
4. 定期更換培養(yǎng)基，保持細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)充足；
5. 對(duì)于生長(zhǎng)緩慢的細(xì)胞株，可以嘗試進(jìn)行克隆篩選或更換培養(yǎng)基。
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