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水溶性菁染料SulfoCy是性能優(yōu)良的熒光標記染料，具有很好的水溶性和很高的摩爾吸光系數，其琥珀酰亞胺酯是常用的脂肪氨基標記試劑，廣泛用于蛋白、抗體、核酸及其他生物分子的標記和檢測。特別是Cy5.5和Cy7的吸收在近紅外區(qū)，已廣泛用于活體成像領域來代替放射性元素。在哺乳動物體內血紅蛋白是吸收可見光的主要成分，能吸收中藍綠光波段的大部分可見光；水和脂質主要吸收紅外線，因此選擇激發(fā)和發(fā)射光譜位于650nm-900nm(近紅外窗口)的近紅外熒光標記的紅光雖然有部分散射消耗但大部分可以穿透哺乳動物組織被敏感的CCD檢測到，更有利于活體光學成像，特別是深層組織的熒光成像。

菁染料和生物分子的比例F/P=4～12之間熒光強度高， F/P值過過高熒光探針會自我淬滅并影響生物分子的生物活性，標記生物分子好是用單琥珀酰亞胺酯，但是用雙修飾的CyDye NHS并沒有發(fā)現交聯(lián)。 CyDye NHS標記抗體在pH (8.5～9.4)時10分鐘F/P可達5～6，而在pH 7.0幾乎不反應。我們用不同比例的 Cy3標記anti-glutathione-S-transferase (GST)多克隆抗體發(fā)現用1:1, 5:1,10:1 和 20:1標記時得到的F/P值分別是0.28:1, 1.16:1, 2.3:1 和4.6:1。

SPF級BALB/C裸鼠，6-8 周齡, 18-20克, 實驗前24 h 自由進食、飲水。

實驗裸鼠麻醉后，將裸鼠俯臥位平放于小動物多光譜活體成像系統(tǒng)的記錄暗箱中。實驗時將Cy7或Cy7標記的生物分子或藥物DMSO稀釋后,于裸鼠尾靜脈注射200μL( 0.5 mg/g) [佳用量和時間需要根據自己的儀器和藥物試劑等條件優(yōu)化]，每5min記錄1張動物在體內發(fā)射熒光的成像圖片，分析熒光藥物的分布情況。對照鼠不注射藥物，進行同時記錄。記錄結束后迅速解剖裸鼠的心、肝、脾、肺、腎等臟器，進行成像。

SulfoCy7 檢測時激發(fā)波長700～770 nm帶通，發(fā)射波長790 nm長通。液晶可調諧濾光片掃描范圍780～950 nm ,掃描步進10 nm。曝光時間為500 ms。

不同的藥物代謝時間不一樣，注射入裸鼠體內，熒光立即分布全身，然后逐步向膀胱聚集，呈現顯著的腎排泄的特點一般4~6小時，快得只有30分鐘；如果是骨骼等部位靶點的Cy7標記藥物，有可能一周后活體成像系統(tǒng)仍能檢測到熒光成像。

器官切片觀察：將解剖的器官迅速放置于4%多聚甲醛固定4小時以上，0%，20%，30%PBS蔗糖依次沉底，20μm切片，多聚賴氨酸洗過的載玻片貼片，晾干，DAPI染色。共聚焦顯微鏡觀察，激光器為氦氖633 nm。

未開封的粉末在避光干燥-20℃存放12月。CyDye NHS水溶液現配現用不能儲存。任何溶解后的CyDye NHS粉末好立即使用；無水的DMSO溶液-20°C保存多2個星期。