麗春紅(Ponceau S)染色液可以用于PVDF膜、硝酸纖維素膜(nitrocellulose membrane)和醋酸纖維素膜(cellulose acetate membrane)上的蛋白的檢測。麗春紅帶負電荷，可以與帶正電荷的氨基酸殘基結(jié)合，同時麗春紅也可以與蛋白的非極性區(qū)相結(jié)合，從而形成紅色的條帶。麗春紅對蛋白的染色是可逆的，染色后可以用蒸餾水，PBS或其它適當(dāng)溶液洗去。
本試劑盒使用方便，本底低，靈敏度較高，對蛋白的檢測下限是250納克。
1. 將PVDF膜、硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜浸沒在麗春紅染色液中，搖動3-5分鐘或更長時間，直至出現(xiàn)清晰條帶。對結(jié)果作適當(dāng)記錄。
2. 用蒸餾水，PBS或其它適當(dāng)溶液漂洗2-3次，每次3-5分鐘，去除麗春紅，進行后續(xù)的Western檢測。
麗春紅染色液不適用于尼龍膜上的蛋白的檢測。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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答：可能的原因有：
1、目的蛋白有多個修飾位點，本身可以呈現(xiàn)多條帶，建議查閱文獻或進行生物信息學(xué)分析，獲得蛋白序列的修飾位點信息，通過去修飾確定蛋白實際大小；
2、樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解,建議加入蛋白酶抑制劑；樣本處理時在冰上操作；
3、雜蛋白多，建議處理目的蛋白；
4、抗體特異性不強，建議使用特異性強的抗體；
5、抗體孵育時間過久，建議減少抗體孵育時間；
6、二抗與抗原有交叉反應(yīng)，建議選擇合適的封閉物；
7、二聚體或多聚體存在，建議增加蛋白質(zhì)變性過程及強度；
8、底物顯色與曝光時間過長，建議縮短顯色及曝光的時間。
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