Western轉膜緩沖液又稱蛋白印跡轉膜緩沖液，適用于Western Blot實驗中把蛋白質轉移到PVDF膜或硝酸纖維素(NC)膜上，以便進行抗體的孵育和下游實驗。
Western轉膜緩沖液主要成分為Tris、甘氨酸等，不含甲醇。不適用于把蛋白質轉移到尼龍膜上，該試劑為10×溶液。
1、按Western轉膜緩沖液(10×):甲醇:蒸餾水=1:2:7的比例，配制1×轉移工作液。
2、大多數蛋白質轉移，應置于4℃進行，以防止蛋白降解。
密閉保存，開啟后盡快用完。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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答：可能的原因有：
1、目的蛋白有多個修飾位點，本身可以呈現多條帶，建議查閱文獻或進行生物信息學分析，獲得蛋白序列的修飾位點信息，通過去修飾確定蛋白實際大小；
2、樣本處理過程中目的蛋白發生降解,建議加入蛋白酶抑制劑；樣本處理時在冰上操作；
3、雜蛋白多，建議處理目的蛋白；
4、抗體特異性不強，建議使用特異性強的抗體；
5、抗體孵育時間過久，建議減少抗體孵育時間；
6、二抗與抗原有交叉反應，建議選擇合適的封閉物；
7、二聚體或多聚體存在，建議增加蛋白質變性過程及強度；
8、底物顯色與曝光時間過長，建議縮短顯色及曝光的時間。
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