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Alamar Blue試劑盒（Alamar Blue Kit）檢測(cè)試劑為細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè)提供了一種簡(jiǎn)便、快速、可靠、安全的方法，適用于高通量檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。該檢測(cè)試劑的主要成分是一種氧化還原指示劑。其在氧化狀態(tài)下呈現(xiàn)紫藍(lán)色無熒光性，而在還原狀態(tài)下，轉(zhuǎn)變?yōu)槌史奂t或紅色熒光的還原產(chǎn)物，吸收峰為530-560nm，而發(fā)射峰為590nm。

在細(xì)胞增殖過程中，細(xì)胞內(nèi)NADPH/NADP、?FADH/FAD、?FMNH/FMN和NADH/NAD的比值升高，處于還原環(huán)境。攝入細(xì)胞內(nèi)的染料被這些代謝中間體及細(xì)胞色素類還原后釋放到細(xì)胞外并溶于培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基從無熒光的靛青藍(lán)變成有熒光的粉紅色。后用普通分光光度計(jì)或熒光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè)，吸光度和熒光強(qiáng)度與活性細(xì)胞數(shù)成正比。

本產(chǎn)品無細(xì)胞毒性，不影響細(xì)胞代謝、細(xì)胞因?分泌、抗體合成等，檢測(cè)后的細(xì)胞仍然可以進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。其適用于細(xì)菌、酵母類、昆蟲類、魚類、哺乳類等多種細(xì)胞，以及貼壁細(xì)胞與非貼壁細(xì)胞的檢測(cè)，可以廣泛用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性以及病原微生物的快速檢測(cè)與鑒定。

1. 在待測(cè)樣品中加? 10%細(xì)胞懸液體積的檢測(cè)試劑，在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 2-6 小時(shí)，培養(yǎng)基的顏色由靛青藍(lán)開始變成粉紅色就可以進(jìn)行下一步。

2. 推薦使用熒光酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)，激發(fā)光波長(zhǎng)在 530-560 nm 之間，發(fā)射光波長(zhǎng)為 590 nm，記錄相對(duì)熒光單位（RFU）。

3. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或細(xì)胞生長(zhǎng)曲線：縱座標(biāo)（Y 軸）為相對(duì)熒光單位（RFU）；橫坐標(biāo)（X 軸）為細(xì)胞數(shù)或時(shí) 間點(diǎn)或藥物濃度。

注意事項(xiàng)：

1. 合適密度的細(xì)胞可以增加檢測(cè)靈敏度。對(duì)于96孔板，我們建議每孔接種100微升細(xì)胞，細(xì)胞濃度范圍為：貼壁細(xì)胞在100-10,000/孔，懸浮細(xì)胞在2,000-50,000/孔，并以培養(yǎng)基為空白對(duì)照。對(duì)于384孔板，細(xì)胞濃度和接種量均減半。

2.   整個(gè)過程均應(yīng)為無菌操作，因?yàn)槲⑸镂廴疚锿瑯涌梢赃€原檢測(cè)試劑而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

3. 注意接種細(xì)胞濃度和加入檢測(cè)試劑后孵育時(shí)間。細(xì)胞濃度過高或孵育時(shí)間過長(zhǎng)，會(huì)導(dǎo)致繼發(fā)性還原反應(yīng)，產(chǎn)生無色和熒光消失。

4. 孵育時(shí)，須避光。

5. 本產(chǎn)品可以使用熒光或分光光度檢測(cè)，但熒光的靈敏度高，實(shí)驗(yàn)誤差小，推薦使用熒光檢測(cè)。