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答：如果能夠排除下面的幾個問題，那么問題多半出現在一抗和抗原制備上。
1、二抗的HRP 活性太強，將底物消耗光；
2、ECL底物中H2O2不穩定，失活；
3、ECL底物沒覆蓋到相應位置；
4、一抗選擇不當；
5、二抗失活。
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