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Western及IP裂解液是一種在非變性條件下裂解細(xì)胞或組織樣品從而制備蛋白樣品的裂解液。本裂解液裂解的細(xì)胞或組織樣品，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(co-IP)和ELISA等。
本產(chǎn)品可以用于動(dòng)物、植物的細(xì)胞或組織樣品，也可以用于真菌或細(xì)菌樣品。
Western及IP裂解液的主要成分為T(mén)ris(pH7.5)，NaCl，1% Triton X-100，以及焦磷酸鈉，β-甘油磷酸，EDTA，原釩酸鈉，leupeptin等多種蛋白酶抑制劑，可以有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用。
用Western及IP裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度。由于含有較高濃度的Triton X-100等干擾物質(zhì)，不能用Bradford法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

保存條件：-20℃保存，一年有效。

貨號(hào)                                 名稱(chēng)                                        規(guī)格

PMK0209                       Western及IP裂解液                  100ml/500ml

（一）貼壁培養(yǎng)細(xì)胞 1、取 Western 及 IP 裂解液置于室溫融解混勻，加入 PMSF，使 PMSF 終濃度為 1mM。 2、去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液清洗 1 次，低速離心，棄上清，留取沉淀。 3、按照 6 孔板每孔加入 100～200μl 含有 PMSF 的 Western 及 IP 裂解液，用移液器輕輕吹打，使裂解液和細(xì)胞 充分接觸，置于冰上或 4℃裂解。通常裂解液作用于細(xì)胞 1～5s，細(xì)胞就會(huì)被裂解。植物細(xì)胞宜在冰上裂解 2-10min。 4、10000～12000g，4℃離心 3～5min（如無(wú)低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可），取上清。 5、進(jìn)行后續(xù)的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 （二）懸浮培養(yǎng)細(xì)胞 1、取 Western 及 IP 裂解液置于室溫融解混勻后，加入 PMSF，使 PMSF 終濃度為 1mM。 2、低速離心懸浮細(xì)胞，棄上清，收集沉淀。 3、用手指輕彈細(xì)胞，使其松散。按照 6 孔板每孔細(xì)胞加入 100～200μl 含有 PMSF 的 Western 及 IP 裂解液。如 果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 150～200μl。再用手指輕彈充分裂解細(xì)胞，充分裂解后應(yīng)沒(méi)有 明顯的細(xì)胞沉淀。 4、10000～12000g，4℃離心 3～5min（如無(wú)低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可），取上清。 5、進(jìn)行后續(xù)的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 （三）組織樣本 1、取 Western 及 IP 裂解液置于室溫融解混勻后，加入 PMSF，使 PMSF 終濃度為 1mM。 2、把組織剪切成細(xì)小的碎片，越小越好。 3、取在液氮或超低溫冰箱中冷凍 30min 以上的組織，迅速研磨，研磨過(guò)程盡量控制在 1～2min 之內(nèi)，以減少蛋 白的降解。 4、按照每 20mg 組織加入 100～200μl 裂解液的比例，加入含有 PMSF 的 Western 及 IP 裂解液，冰上或 4℃裂解 30～60min。 5、步驟 3、4 亦可以采用如下過(guò)程：按照每 20mg 組織加入 100～200μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的 Western 及 IP 裂解液。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿，直至充分裂解。該過(guò)程盡量控制在 1～2min 之內(nèi)，以減少蛋白 的降解。 6、10000～12000g，4℃離心 5～10min（如無(wú)低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可），取上清。 7、進(jìn)行后續(xù)的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

1. 為取得佳的使用效果，盡量避免過(guò)多的反復(fù)凍融。建議將其適當(dāng)分裝成合適的量，然后置-20℃中保存。 2. 裂解細(xì)胞抽提蛋白的所有步驟都需在冰上或 4℃進(jìn)行。 3. 建議在臨用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF，使 PMSF 的終濃度為 1mM。PMSF 可以向我公司訂購(gòu)。 4. 在貼壁培養(yǎng)細(xì)胞的操作步驟中，去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液后，如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾，可以不用清洗。 5. 如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。 6. 在培養(yǎng)細(xì)胞的裂解液中，如果細(xì)胞量較多，必須分裝成 50~100 萬(wàn)細(xì)胞/離心管，然后再裂解。大團(tuán)的細(xì)胞較 難裂解充分，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸，相對(duì)容易裂解充分。 7. 如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過(guò)強(qiáng)烈 vortex 使樣品裂解充分。然后 同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器或研磨設(shè)備，缺點(diǎn)是不如勻漿器 或研磨那樣裂解得比較充分。