細(xì)菌污染
細(xì)菌污染是為常見的一種污染類型，也是容易分辨和判斷的類型。細(xì)胞被細(xì)菌污染后，培養(yǎng)基會變得渾濁、發(fā)黃，在顯微鏡下觀察細(xì)菌形態(tài)通常呈球狀或桿狀，分布也比較均勻，有定向運(yùn)動；增殖速度極快，并伴隨有大量酸性物質(zhì)產(chǎn)生，受細(xì)菌污染的細(xì)胞鏡下觀察發(fā)現(xiàn)其胞質(zhì)中會出現(xiàn)大量顆粒物，并且細(xì)胞的生長速度緩慢，形態(tài)逐漸變圓直至死亡，如若不及時處理，細(xì)胞基本會全軍覆沒。
注：在細(xì)胞生長良好的情況下如不及時更換培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)被細(xì)胞逐漸消耗，培養(yǎng)基顏色也會逐漸變黃，所以還要注意觀察細(xì)胞的生長狀況，不是所有的培養(yǎng)基變黃都是由細(xì)菌污染造成的。
真菌污染
常見的真菌污染主要包括念珠菌、酵母菌和霉菌污染。真菌污染時，培養(yǎng)基無明顯顏色變化，但會有肉眼可見的菌落形成。顯微鏡下可觀察到絲狀、管狀、樹枝狀或鏈球狀的菌絲。其中，霉菌污染比較好辨別，培養(yǎng)基中通常會出現(xiàn)絮狀物，而其他大部分真菌污染后培養(yǎng)基仍然是清亮的。
支原體污染
支原體污染在細(xì)胞培養(yǎng)中發(fā)生率較高的污染類型，比細(xì)菌、真菌污染更加難以察覺，培養(yǎng)基不渾濁，細(xì)胞形態(tài)變化不顯著。由于支原體是目前已知的小的原核生物，所以在顯微鏡下無法觀察到。細(xì)胞受支原體污染后，培養(yǎng)基無明顯變化，但細(xì)胞的生長速度會明顯減慢，細(xì)胞狀態(tài)明顯受到影響，會產(chǎn)生很多細(xì)小的碎片，細(xì)胞的形態(tài)也會發(fā)生變化，細(xì)胞間會出現(xiàn)“拉絲”現(xiàn)象。
黑膠蟲污染
黑膠蟲污染是比較好辨別的。通常情況下，細(xì)胞受黑膠蟲污染后經(jīng)過顯微鏡觀察會發(fā)現(xiàn)鏡下在細(xì)胞周圍和培養(yǎng)基中會出現(xiàn)大量“小黑點(diǎn)”，且在不停運(yùn)動，且隨著培養(yǎng)時間的延長，“小黑點(diǎn)”逐漸增多，更換培養(yǎng)液和PBS洗滌也無法將其清除。受黑膠蟲污染后，培養(yǎng)基染色一般不會發(fā)生改變，但細(xì)胞生長緩慢，有時甚至出現(xiàn)空泡，細(xì)胞狀態(tài)明顯變差。
細(xì)胞交叉污染
細(xì)胞間交叉污染情況通常出現(xiàn)在同時培養(yǎng)處理幾種細(xì)胞。由于使用器具和培養(yǎng)基混雜，或者操作失誤引起的。為避免此種污染，可以一次處理一種細(xì)胞；不可避免要同時處理多種細(xì)胞時，應(yīng)做好標(biāo)記，移液管和槍頭不應(yīng)接觸瓶口；同時細(xì)胞早期應(yīng)做好充足的凍存儲備，以備不時之需。
如何預(yù)防細(xì)胞污染
1.實(shí)驗(yàn)前后均需對實(shí)驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行清潔，除用消毒試劑進(jìn)行擦拭外，還需用紫外燈進(jìn)行照射；
2.盡量避免將外界環(huán)境中的微生物帶入實(shí)驗(yàn)室，因此在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室之前，換用干凈的實(shí)驗(yàn)服、鞋套、口罩、帽子。
3.提前準(zhǔn)備好細(xì)胞實(shí)驗(yàn)操作所用到的所有的實(shí)驗(yàn)試劑及耗材，用酒精棉球擦拭物品表面后再將其放入超凈工作臺或生物安全柜中進(jìn)行紫外燈照射；
4.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)所用到的實(shí)驗(yàn)試劑和耗材好嚴(yán)格密封，盡量避免長期暴露在空氣中，且在生物安全柜或超凈工作臺中進(jìn)行拆封；
5.取放細(xì)胞時，不僅要對培養(yǎng)瓶表面進(jìn)行消毒，還需對手部、培養(yǎng)箱外表面進(jìn)行消毒，且每次手在進(jìn)出時必須消毒；
6.大部分實(shí)驗(yàn)室沒有獨(dú)立的細(xì)胞房，多個課題組混用同一個細(xì)胞房。因此，在取放細(xì)胞時，還需要注意培養(yǎng)箱中其他細(xì)胞的培養(yǎng)狀態(tài)，如有異常，及時轉(zhuǎn)移細(xì)胞，以免受到污染。
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